Informationen Zu Schnellen Molekularen Tests, RT-PCR Und Anderen Molekularen Tests Zur Diagnose Einer Influenzavirusinfektion

2023 Autor: Stephanie Arnold | [email protected]. Zuletzt bearbeitet: 2023-05-20 19:51

• Hintergrund
• Verwendung in der klinischen Entscheidungsfindung
• Influenza-Tests bei Krankenhauspatienten
• Verwendung bei der Erkennung von institutionellen Influenza-Ausbrüchen
• Verwendung bei der Erkennung neuartiger Influenza-A-Fälle
• Faktoren, die die Ergebnisse molekularer Assays beeinflussen
• Interpretation der Testergebnisse
• Vor- und Nachteile molekularer Assays
• Verweise

Hintergrund

Zu den zum Nachweis einer Influenzavirusinfektion verfügbaren molekularen Tests gehören schnelle molekulare Tests, die reverse Transkriptions-Polymerase-Kettenreaktion (RT-PCR) und andere Nukleinsäureamplifikationstests. Diese Tests können Influenza-Virus-RNA oder -Nukleinsäuren in Atmungsproben mit hoher Empfindlichkeit und hoher Spezifität nachweisen. Insbesondere zeigt der Nachweis von Influenza-Virus-RNA oder -Nukleinsäuren durch molekulare Assays nicht notwendigerweise den Nachweis eines lebensfähigen Virus oder eine laufende Influenza-Virus-Replikation an. Verfügbare von der FDA zugelassene molekulare Assays sind in Tabelle 3 aufgeführt.

Schnelle molekulare Assays sind eine neue Art von molekularem Influenza-Diagnosetest zum Nachweis von Influenza-Virus-RNA oder -Nukleinsäuren in Proben der oberen Atemwege in etwa 15 bis 30 Minuten. Eine Plattform verwendet eine isotherme Nukleinsäureamplifikation und weist eine hohe Empfindlichkeit auf und liefert Ergebnisse in 15 Minuten oder weniger. Andere Plattformen verwenden RT-PCR und liefern Ergebnisse in ungefähr 20 bis 30 Minuten. Die berichteten Empfindlichkeiten der verfügbaren schnellen molekularen Assays liegen zwischen 66 und 100%. Wie bei anderen molekulardiagnostischen Tests sollte bei Patienten mit Verdacht auf Influenza die antivirale Behandlung NICHT vorenthalten werden, wenn die Behandlung klinisch angezeigt ist. Weitere Informationen zur antiviralen Behandlung von Influenza finden Sie unter Antivirale Medikamente, Informationen für Angehörige der Gesundheitsberufe.

Einige molekulare Assays können Infektionen mit Influenza A- und B-Viren erkennen und unterscheiden. Andere Tests können auch spezifische saisonale Influenza-A-Virus-Subtypen identifizieren, beispielsweise A (H1N1) pdm09 oder A (H3N2). Von der FDA zugelassene schnelle molekulare Assays können Ergebnisse in 15 bis 30 Minuten liefern, und einige sind für die Verwendung am Behandlungsort von der CLIA ausgeschlossen. Andere molekulare Assays können je nach Assay Ergebnisse in 45-80 Minuten oder mehreren Stunden liefern. Es sind einige von der FDA zugelassene molekulare Tests mit mehreren Krankheitserregern verfügbar, mit denen Influenzaviren und andere Krankheitserreger der Atemwege nachgewiesen werden können.

Verwendung in der klinischen Entscheidungsfindung

• Influenza-Tests sind nicht für alle ambulanten Patienten mit Anzeichen und Symptomen einer Influenza erforderlich, um Entscheidungen zur antiviralen Behandlung zu treffen (siehe Abbildung 1, Abbildung 2). Sobald eine Influenza-Aktivität in der Gemeinde oder im geografischen Gebiet festgestellt wurde, kann eine klinische Diagnose der Influenza für ambulante Patienten mit Anzeichen und Symptomen im Zusammenhang mit dem Verdacht auf Influenza gestellt werden, insbesondere in Zeiten hoher Influenza-Aktivität in der Gemeinde. Schnelle molekulare Assays, die in ungefähr 15 bis 30 Minuten zu Ergebnissen führen können, und andere molekulare Assays, die Influenza-Virus-RNA oder -Nukleinsäuren in ungefähr 45 bis 80 Minuten nachweisen können, sind jetzt in Krankenhäusern erhältlich (siehe Tabelle 3). Die Infectious Diseases Society of America (IDSA) empfiehlt die Verwendung von molekularen Influenza-Schnelltests gegenüber Influenza-Schnelltests (RIDTs) zum Nachweis von Influenzaviren in Atemwegsproben ambulanter Patienten. Empfehlungen zu Influenza-Tests und Informationen zur Interpretation der Testergebnisse finden Sie im IDidel Influenza Clinical Practice Guidelinesexternal-Symbol

  Ärzte sollten die zugelassenen klinischen Proben für den verwendeten molekularen Assay kennen

• Molekulare Tests werden für alle hospitalisierten Patienten mit Verdacht auf Influenza empfohlen.

• Wenn die Behandlung klinisch angezeigt ist, sollte die antivirale Behandlung NICHT ambulanten oder hospitalisierten Patienten mit Verdacht auf Influenza vorenthalten werden, bis die Ergebnisse der Influenza-Tests vorliegen. Weitere Informationen zur antiviralen Behandlung von Influenza finden Sie unter Antivirale Medikamente, Informationen für Angehörige der Gesundheitsberufe.

  Da Ergebnisse aus molekularen Tests möglicherweise nicht immer verfügbar sind, wenn anfängliche Therapieentscheidungen getroffen werden müssen, sollte die antivirale Behandlung so bald wie möglich begonnen werden, da der größte klinische Nutzen darin besteht, dass die Behandlung so nahe wie möglich am Krankheitsbeginn beginnt, insbesondere bei Krankenhauspatienten und ambulante Patienten mit hohem Risiko für schwerwiegende Komplikationen

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Influenza-Tests bei Krankenhauspatienten

• Krankenhauspatienten mit Verdacht auf Influenza ohne Erkrankung der unteren Atemwege sollten Proben der oberen Atemwege für Influenza-Tests durch einen molekularen Test entnehmen lassen. Die Infectious Diseases Society of America (IDSA) empfiehlt die Verwendung von RT-PCR oder anderen molekularen Tests zum Nachweis von Influenzaviren in Atemwegsproben von Krankenhauspatienten. Empfehlungen zu Influenza-Tests und Informationen zur Interpretation der Testergebnisse finden Sie im IDidel Influenza Clinical Practice Guidelinesexternal-Symbol.
• Weitere Informationen zur antiviralen Behandlung von Influenza finden Sie unter Antivirale Medikamente, Informationen für Angehörige der Gesundheitsberufe.
• Die Entnahme von Proben der unteren Atemwege von Krankenhauspatienten mit Verdacht auf Influenza und Lungenentzündung kann für Influenza-Tests durch RT-PCR und andere molekulare Tests in Betracht gezogen werden, wenn die Influenza-Tests der Proben der oberen Atemwege negativ sind und positive Tests zu einer Änderung des klinischen Managements führen würden. Krankenhauspatienten mit Verdacht auf Influenza und Atemstillstand bei mechanischer Beatmung können eine endotracheale Aspiratprobe für Influenza-Tests mittels RT-PCR entnehmen lassen, wenn keine Labordiagnose der Influenza festgestellt wurde. Bronchoalveoläre Lavageflüssigkeit kann, wenn sie für andere diagnostische Zwecke gesammelt wird, auch durch RT-PCR oder andere molekulare Tests auf Influenzaviren getestet werden. Derzeit ist nur der CDC-RT-PCR-Assay von der FDA für Proben der unteren Atemwege zugelassen. Dieser Test ist nur in qualifizierten Labors für öffentliche Gesundheit erhältlich (siehe Tabelle 1. Von der FDA zugelassene RT-PCR-Tests und andere molekulare Tests für Influenzaviren pdf-Symbol [311 KB, 6 Seiten]). Ärzte können andere von der FDA zugelassene Tests zur Off-Label-Verwendung bei der Bewertung von Proben der unteren Atemwege bestellen. Die Leistung dieser Tests für diese Proben wurde von der FDA nicht bewertet. Diese Tests sind jedoch an einigen Institutionen möglicherweise leichter zugänglich.

Verwendung bei der Erkennung von institutionellen Influenza-Ausbrüchen

• Molekulare Assays wie die RT-PCR sind besonders nützlich, um Influenzavirusinfektionen als Ursache für Atemwegsausbrüche in Einrichtungen (z. B. Pflegeheimen, Einrichtungen für chronische Pflege und Krankenhäusern) zu identifizieren.
• Positive Ergebnisse von einer oder mehreren kranken Personen mit Verdacht auf Influenza können Entscheidungen unterstützen, um Präventions- und Kontrollmaßnahmen für Influenza-Ausbrüche unverzüglich umzusetzen. Ärzte sollten die Anforderungen ihrer Gesundheitsbehörden bezüglich der sofortigen Benachrichtigung über vermutete oder bestätigte institutionelle Influenza-Ausbrüche kennen und wissen, wann Atemproben von kranken Personen entnommen und zur Bestätigung der Influenza im Labor an ein Labor für öffentliche Gesundheit geschickt werden sollten.
• Es liegen vorläufige Leitlinien für das Management von Influenza-Ausbrüchen in Langzeitpflege- und Postakutversorgungseinrichtungen vor.
• Empfehlungen zur Bekämpfung institutioneller Influenza-Ausbrüche durch die externe Ikone der Infectious Diseases Society of America sind verfügbar.

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Verwendung bei der Erkennung neuartiger Influenza-A-Fälle

• Molekulare Assays wie die RT-PCR dienen zur genauen Identifizierung von Influenza A- und B-Virus-RNA oder -Nukleinsäuren unter Verwendung konservierter Genziele. Einige Tests erkennen Influenza A- oder B-Viren, bestimmen jedoch nicht den Influenza A-Virus-Subtyp und können daher nicht anzeigen, ob die Infektion auf ein neuartiges Influenza A-Virus zurückzuführen ist. Neuartige Influenza-A-Viren unterscheiden sich antigen und genetisch von den derzeit beim Menschen zirkulierenden saisonalen Influenza-A-Viren und stellen normalerweise eine zoonotische Übertragung von Vogel- oder Schweinearten auf den Menschen dar.
• Einige von der FDA zugelassene Geräte können Influenza A- oder B-Viren erkennen und auch Influenza A-Hämagglutinin-Gene identifizieren, wodurch einige oder alle saisonalen Influenza A-Virus-Subtypen bestimmt werden können, z. B. A (H1N1) pdm09 oder A (H3N2). Diese Tests identifizieren nicht nur die derzeit zirkulierenden Influenza A-Viren, sondern können auch Viren identifizieren, die als Influenza A erkannt werden und für die kein Subtyp identifiziert werden konnte. Diese "unsubtypables" können neuartige Influenza-A-Virusinfektionen darstellen.
• Kliniker und Laboranten verwenden molekulare Assays, mit denen alle derzeit zirkulierenden saisonalen Influenza-A-Virus-Subtypen nachgewiesen werden können, z. B. A (H1N1) pdm09 oder A (H3N2). Wer ein „unsubtypisierbares“Ergebnis feststellt (dh Influenza A ohne Subtyp), sollte sich unverzüglich an sein staatliches oder örtliches Gesundheitslabor wenden, um zusätzliche Tests durchzuführen, um festzustellen, ob die Infektion auf ein neuartiges Influenza A-Virus zurückzuführen ist.
• Kliniker und Laboranten, die molekulare Tests verwenden, die Influenza-A-Viren nachweisen, die derzeit zirkulierende saisonale Influenza-A-Virus-Subtypen, z. B. A (H1N1) pdm09 oder A (H3N2), nicht spezifisch identifizieren und die den Verdacht auf eine neuartige Influenza-A-Virusinfektion haben, sollten sich an ihren Staat wenden oder sofort ein örtliches Gesundheitslabor, um zusätzliche Tests durchzuführen, um festzustellen, ob die Infektion auf ein neuartiges Influenza-A-Virus zurückzuführen ist.

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Faktoren, die die Ergebnisse molekularer Assays beeinflussen

Viele Faktoren können die Ergebnisse von Influenza-Tests beeinflussen. Bei immunkompetenten Patienten mit unkomplizierter Influenza nimmt die Influenza-Virusausscheidung in den oberen Atemwegen im Allgemeinen nach 4 Tagen erheblich ab, obwohl Säuglinge und Kleinkinder möglicherweise über längere Zeiträume nachweisbare Influenzaviren haben. Patienten mit Erkrankungen der unteren Atemwege können eine verlängerte Influenza-Virusreplikation in den unteren Atemwegen aufweisen. Immunsupprimierte Patienten und Personen, die systemische Kortikosteroide mit Erkrankungen der unteren Atemwege erhalten, können auch eine verlängerte Influenza-Virusreplikation in den unteren Atemwegen aufweisen. Molekulare Assays können Influenza-Virus-RNA (positive Ergebnisse) länger nachweisen als andere Influenza-Tests (z. B. Antigen-Nachweis - Immunfluoreszenz- oder Influenza-Schnelltests). Obwohl molekulare Assays eine hohe Empfindlichkeit aufweisen, können bei Patienten mit Influenza aus mehreren Gründen negative Ergebnisse auftreten, sodass negative RT-PCR-Ergebnisse von molekularen Assays eine Influenza-Diagnose möglicherweise nicht immer ausschließen. Wenn der klinische Verdacht auf Influenza hoch ist, sollte die antivirale Behandlung bei Patienten mit schwerer Krankheit oder hohem Risiko für Komplikationen fortgesetzt werden, während zusätzliche Atemproben entnommen und weitere Influenza-Tests durchgeführt werden.

Faktoren, die die Ergebnisse von Influenza-Tests beeinflussen können, sind:

• Zeit vom Beginn der Krankheit bis zur Entnahme von Atemproben zum Testen

  Atemwegsproben sollten idealerweise so früh wie möglich (idealerweise weniger als 4 Tage nach Krankheitsbeginn, wenn die Influenza-Virusausscheidung am höchsten ist) bei Personen ohne Erkrankung der unteren Atemwege entnommen und so bald wie möglich getestet werden. Molekulare Assays können Influenzavirus-RNA oder -Nukleinsäuren in Atemwegsproben möglicherweise länger nachweisen als andere Tests Influenzaviren nachweisen können (z. B. 72 Stunden nach Krankheitsbeginn)

• Quelle der getesteten Atemproben und Probenhandhabung

  • Die besten Proben der oberen Atemwege zum Nachweis von Influenza-Virus-RNA durch RT-PCR und andere molekulare Tests sind Nasopharynxabstriche, Waschungen oder Aspirate. andere akzeptable Proben sind ein Nasen- und / oder Rachenabstrich. Ein Tupfer mit einem Holzschaft sollte nicht zur Entnahme von Atemwegsproben verwendet werden, da dies die RT-PCR und andere molekulare Assays beeinträchtigen kann. Ärzte sollten wissen, welche zugelassenen klinischen Proben für den verwendeten molekularen Assay zugelassen sind und welche Art von Tupfern für die Verwendung mit dem Assay empfohlen werden, wie in den Anweisungen des Herstellers im Assay enthalten.
  • Krankenhauspatienten mit Erkrankungen der unteren Atemwege können im Vergleich zu den oberen Atemwegen eine verlängerte Influenza-Virusreplikation der unteren Atemwege aufweisen. Bei Patienten mit Erkrankungen der unteren Atemwege sollten Proben der unteren Atemwege entnommen und getestet werden, wenn der Verdacht auf Influenza besteht und die Prüfung der Proben der oberen Atemwege negativ ist. Bei kritisch kranken Patienten mit Verdacht auf Influenza sollte die Entnahme zusätzlicher Atemproben an mehreren Stellen, insbesondere der unteren Atemwege (Endotrachealaspirat oder bronchoalveoläre Lavage - in Betracht gezogen werden, sofern dies klinisch angezeigt ist, auch wenn der Test mittels RT-PCR oder anderen molekularen Tests negativ ist für andere diagnostische Zwecke) und durch RT-PCR oder andere molekulare Assays erneut auf Influenzaviren getestet. Die antivirale Behandlung sollte bei solchen Patienten fortgesetzt werden, bis zusätzliche Influenza-Tests durchgeführt werden.
  • Wenn sich die Tests verzögern oder in einer anderen Einrichtung als der des Krankenhauses durchgeführt werden, sollten die Proben gemäß den Testspezifikationen in sterile virale Transportmedien gelegt und gekühlt werden, bis sie so schnell wie möglich zum Testen ins Labor transportiert werden. Einfrieren und Auftauen sollte vermieden oder minimiert werden, um den Abbau von Influenzaviren zu vermeiden, wenn eine Viruskultur durchgeführt wird.
  • Die Anweisungen des Herstellers, einschließlich akzeptabler Proben, Handhabung sowie Lagerung und Verarbeitung, sollten befolgt werden, um eine optimale Testleistung zu erzielen. Abweichungen von den empfohlenen Verfahren können zu falsch negativen Ergebnissen führen.

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Interpretation der Testergebnisse

Die Sensitivitäten und Spezifitäten von RT-PCR und anderen molekularen Assays, die von der FDA für diagnostische Zwecke zugelassen wurden, sind im Vergleich zu anderen von der FDA zugelassenen Assays, die andere Methoden verwenden, sehr hoch. Selbst bei der RT-PCR können jedoch aufgrund einer unsachgemäßen oder schlechten klinischen Probenentnahme oder einer schlechten Handhabung einer Probe nach der Entnahme und vor dem Testen falsch negative Ergebnisse auftreten. Ein negatives Ergebnis kann auch durch Testen einer Probe auftreten, die entnommen wurde, wenn der Patient kein nachweisbares Influenzavirus mehr abgibt. Obwohl selten, können falsch positive Ergebnisse auftreten (z. B. aufgrund von Laborkontamination oder anderen Faktoren). Informationen zur Interpretation der Influenza-Testergebnisse finden Sie auch im Symbol IDSA Influenza Clinical Practice Guidelinesexternal.

• Negatives Ergebnis

  Ein negatives Ergebnis bedeutet, dass in der getesteten Atmungsprobe keine Hinweise auf Influenza-Virus-RNA oder -Nukleinsäuren vorliegen. Bei Patienten im Krankenhaus, insbesondere bei Patienten mit Erkrankungen der unteren Atemwege, sollten zusätzliche Proben entnommen und getestet werden, wenn keine andere Ätiologie festgestellt wird und der Verdacht auf Influenza klinisch besteht, und die antivirale Behandlung sollte eingeleitet oder fortgesetzt werden

• Positives Ergebnis

  • Ein positives Ergebnis zeigt den Nachweis von Influenza-Virus-RNA oder -Nukleinsäuren in der getesteten Atemprobe an, was eine Influenzavirus-Infektion bestätigt, bedeutet jedoch nicht unbedingt, dass ein infektiöses Virus vorhanden ist oder dass der Patient ansteckend ist.
  • Ein positives Ergebnis beim Testen einer Probe der oberen Atemwege bei einer Person, die kürzlich eine intranasale Verabreichung eines abgeschwächten Influenza-Lebendimpfstoffs (LAIV) erhalten hat, kann auf den Nachweis eines Impfvirus hinweisen. LAIV enthält Influenzavirusstämme, die in Atemgeweben mit niedrigerer Temperatur (z. B. Nasengängen) als der inneren Körpertemperatur eine Virusreplikation erfahren. Da die Nasengänge während der LAIV-Verabreichung mit Lebend-Influenzavirus-Impfstoffstämmen infiziert sind, kann die Probenahme der Nasengänge innerhalb weniger Tage nach der LAIV-Impfung zu positiven Influenza-Testergebnissen führen. Es kann möglich sein, LAIV-Impfstoffstämme bis zu 7 Tage nach der Impfung und in seltenen Situationen über längere Zeiträume nachzuweisen.
  • Die Interpretation des Influenza-Molekularassays hängt von dem einzelnen Test ab, der durchgeführt wird. Beispielsweise schließt ein negatives Ergebnis eines Influenza-Molekularassays, der nur das Influenza-A-Virus und den Subtyp A (H1N1) pdm09 nachweist, eine Infektion mit dem Influenza-B-Virus nicht aus. Ärzte können die Packungsbeilage konsultieren, um eine detaillierte Beschreibung jedes von der FDA zugelassenen Tests zu erhalten und zu erfahren, was das Ergebnis bedeuten kann oder nicht.

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Vor- und Nachteile molekularer Assays

Vorteile:

• Schnelle molekulare Assays und einige im Handel erhältliche molekulare Assays können in einem angemessenen Zeitraum zu Ergebnissen führen, um das klinische Management zu informieren (von ungefähr 15 bis 30 Minuten bis weniger als 1, 5 Stunden).
• Molekulare Assays sind empfindlicher und spezifischer für den Nachweis von Influenzaviren als andere Influenzatests (z. B. schnelle Influenzadiagnosetests, Immunfluoreszenz und Viruskultur).
• Die Wahrscheinlichkeit eines falsch positiven oder falsch negativen Ergebnisses ist gering, und daher wird die Interpretation des Ergebnisses weniger von der Influenza-Aktivität in der Gemeinde beeinflusst.
• Einige, aber nicht alle molekularen Tests können zwischen spezifischen Influenza-A-Virus-Subtypen unterscheiden.

Nachteile:

• Die Ergebnisse einiger RT-PCR- und anderer molekularer Assays sind möglicherweise nicht in einem klinisch relevanten Zeitrahmen verfügbar, um klinische Managemententscheidungen zu treffen.

• RT-PCR und andere molekulare Assays sind möglicherweise nicht in allen ambulanten oder Notaufnahmen verfügbar. Für Krankenhauspatienten sind diese Tests nicht immer vor Ort verfügbar.

  Atemproben müssen möglicherweise zur RT-PCR an ein staatliches Labor für öffentliche Gesundheit oder ein kommerzielles Labor geschickt werden. Obwohl der Test Ergebnisse in 4 bis 8 Stunden liefern kann, kann die tatsächliche Zeit zum Erhalten der Ergebnisse daher wesentlich länger sein

• Die meisten von der FDA zugelassenen molekularen Assays sind nicht zum Testen von Proben der unteren Atemwege zugelassen
• RT-PCR und andere molekulare Assays sind im Allgemeinen teurer als andere Influenza-Tests
• Einige molekulare Assays identifizieren möglicherweise nicht alle derzeit zirkulierenden Influenza-A-Virus-Subtypen. Abhängig vom Test kann ein negatives Ergebnis für einen Influenza-A-Virus-Subtyp eine Infektion mit einem anderen Influenza-A-Virus-Subtyp nicht ausschließen.
• Einige verwendete Influenza-Molekularassays sind nicht von der FDA zugelassen, und es wurde keine Bewertung durchgeführt, um die Genauigkeit aller verfügbaren RT-PCR- und Molekularassays zu bewerten. Eine Liste der von der FDA zugelassenen Tests finden Sie in Tabelle 3.
• Schnelle molekulare Assays können im Vergleich zu anderen RT-PCR- und anderen molekularen Assays eine etwas geringere Empfindlichkeit zum Nachweis von Influenzaviren aufweisen.

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